細(xì)胞名稱：D3hCMEC人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細(xì)胞后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細(xì)胞復(fù)蘇：

1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？細(xì)胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細(xì)胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖形成匯合地單層細(xì)胞或密集地細(xì)胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞zui大的生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的*性。細(xì)胞系是不斷生長，分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細(xì)胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。

2、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細(xì)胞儲存在-80℃，這樣會對細(xì)胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細(xì)胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細(xì)胞類型也是很有利的。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細(xì)胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細(xì)胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1. 細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2. 細(xì)胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS3871ChCMEC/D3hCMEC/D3(人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞)

YS3872C PANC-1（ASPC-1)人胰腺癌細(xì)胞

YS3873C NP69(BT-B)人鼻咽上皮細(xì)胞

YS3874C HUH-28(BT-549)人膽管癌細(xì)胞

YS3875C Hut-102(鼠源）人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞

YS3876C TE-5（TE-1)人食管癌細(xì)胞

YS3877C scc-9(CAL27)人鱗狀上皮舌癌細(xì)胞

YS3878C RPMI-8226（CA46）人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞

YS3879C TPC-1人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株

YS3880C SU-DHL-10人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

YS3881C ZR-75-30無人乳腺癌細(xì)胞

YS3882C Jurkat（cloneE6-1）人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS3883C HFL-1人胚肺成纖維細(xì)胞

YS3884C C8166人T細(xì)胞性白血病細(xì)胞

YS3885C H9人T淋巴瘤白血病細(xì)

YS3886C SK-MEL-2人皮膚黑色素瘤細(xì)胞

YS3887C HMEC-1人微血管內(nèi)皮細(xì)胞株

YS3888C HL-60人早幼粒急性白血病細(xì)胞

YS3889C NALM-6人前B急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS3890C NCI-H1944人肺癌細(xì)胞

YS3891C L929小鼠結(jié)締組織L細(xì)胞株929克隆

YS3892C MPC-5小鼠足細(xì)胞

YS3893C BAF3、BA/F3小鼠原B細(xì)胞株

YS3894C Mcf-7/ADR人乳腺癌耐藥細(xì)胞株

YS3895C K562/ADR人慢性骨髓性白血病耐藥細(xì)胞株

YS3896C SGC-7901/DDP人胃癌細(xì)胞耐藥株

YS3897C MDA-MB-231-GFP人乳腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

YS3898C MDA-MB-468-RED人乳腺癌細(xì)胞-紅色標(biāo)記

YS3899C CNE1-LUC人鼻咽癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記

YS3900C MCF7-GFP人乳腺癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

YS3901C HELA-GFP人宮頸癌細(xì)胞-綠色標(biāo)記

YS3902C B16-F10--RED小鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞-紅色標(biāo)記

YS3903C SK-MEL-2-LUC人皮膚黑色素瘤細(xì)胞熒光標(biāo)記

YS3904C NCTCclone929(L929)小鼠成纖維細(xì)胞

YS3905C K562人慢性髓原白血病細(xì)胞

YS3907C HCT-8[HRT-18]人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

YS3908C 95D人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞(高轉(zhuǎn)移)

YS3909C Calu-3人肺腺癌(胸水)細(xì)胞

YS3910C CA46人Burkitts淋巴瘤細(xì)胞

YS3911C BSC-1非洲綠猴腎細(xì)胞

YS3912C HL7702[L02]人肝正常細(xì)胞

YS3913C KM12-SM人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞

YS3914C KCL-22人慢性髓系白血病細(xì)胞

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