細胞名稱：HELF人胚肺成纖維細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)加倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS1603P豬視網(wǎng)膜星形膠質(zhì)原代細胞

YS1604P豬視網(wǎng)膜色素上皮原代細胞

YS1605P豬晶狀體上皮原代細胞

YS1606P豬角膜上皮原代細胞

YS1607P牛腦微血管內(nèi)皮原代細胞

YS1608P牛真皮成纖維原代細胞

YS1609P人肝實質(zhì)原代細胞

YS1610P人肝星狀原代細胞

YS1611P人Kupffer原代細胞

YS1612P人膽管上皮原代細胞

YS1613P人肝成纖維原代細胞

YS1614P人心肌成纖維原代細胞

YS1615P人主動脈外膜成纖維原代細胞

YS1616P人大隱靜脈平滑肌原代細胞

YS1617P人皮質(zhì)神經(jīng)元原代細胞

YS1618P人海馬神經(jīng)元原代細胞

YS1619P人小膠質(zhì)原代細胞

YS1620P人少突膠質(zhì)原代細胞

YS1621P人腦星形膠質(zhì)原代細胞

YS1622P人腦周原代細胞

YS1623P人神經(jīng)干原代細胞

YS1624P人脊髓神經(jīng)元原代細胞

YS1625P人脊髓膠質(zhì)原代細胞

YS1626P人胰島原代細胞

YS1627P人腺泡原代細胞

YS1628P人胰腺上皮原代細胞

YS1629P人甲狀腺上皮原代細胞

YS1630P人氣道平滑肌原代細胞

YS1631P人氣道上皮原代細胞

YS1632P人肺泡巨噬原代細胞

YS1633P人肺大動脈平滑肌原代細胞

YS1634P人肺大靜脈平滑肌原代細胞

YS1635P人腎小球上皮原代細胞

YS1636P人腎足突原代細胞

YS1637P人腎動脈平滑肌原代細胞

YS1638P人腎靜脈平滑肌原代細胞

YS1639P人前列腺平滑肌原代細胞

YS1640P人膀胱上皮原代細胞

YS1641P人食管平滑肌原代細胞

YS1642P人胃粘膜上皮原代細胞

YS1643P人小腸上皮原代細胞

YS1644P人小腸平滑肌原代細胞

YS1645P人小腸固有層成纖維原代細胞

YS1646P人子宮內(nèi)膜上皮原代細胞

YS1647P人子宮頸上皮原代細胞

YS1648P人子宮平滑肌原代細胞

YS1649P人海綿體平滑肌原代細胞

YS1650P人卵巢顆粒原代細胞

YS1651P人胎盤滋養(yǎng)層原代細胞

YS1652P人胚胎成纖維原代細胞

YS1653P人骨髓內(nèi)皮祖原代細胞

YS1654P人骨髓巨噬原代細胞

YS1655P人骨髓樹突狀原代細胞

YS1656P人破骨原代細胞

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YS1658P人表皮角質(zhì)形成層原代細胞

YS1659P人脂肪干原代細胞

YS1660P人脂肪原代細胞

YS1661P人角膜內(nèi)皮原代細胞

YS1662P人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮原代細胞

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YS1664P人牙乳頭原代細胞

YS1665P人脾淋巴原代細胞

YS1666P人脾巨噬原代細胞

YS1667P人臍帶血單個核原代細胞

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YS1671P人肝癌組織源原代細胞

YS1672P人腎癌組織源原代細胞

YS1673P人肺癌組織源原代細胞

YS1674P人乳腺癌組織源原代細胞

YS1675P人前列腺癌組織源原代細胞

YS1676P人食管癌組織源原代細胞

YS1677P人結(jié)腸癌組織源原代細胞

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